На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму

Техника окраски по Граму

Методы окраски микроорганизмов.

Простая окраска.

Способы окрашивания микробов делятся на простые и сложные, или дифференциальные.

Простая окраска позволет быстро и хорошо ознакомиться с общей морфологией микробов, ввиду чего этот способ применяется в лабораториях наиболее часто.

Фуксин красит более(1-2 минуты), интенсивнее и окрашивает одинаково все виды бактерий.

Сложные методы окраски бактерий.

Сложные, или дифференцированные, способы окраски бактерий основаны на особенностях физико-химического строения микробной клетки. Он применяются для длительного изучения структуры клетки, а также для характеристики и дифференциации данного микроба от других. Таким образом, сложные способы окраски микробов являются необходимым диагностическим методом в микробиологической практике. Наибольшее практическое значение имеет окраска по Граму и по Цилю-Нильсену.

Окраска по Граму.

Сущность этого метода состоит в том, что краска трифенилметанового ряда, например, генцианвиолет, и йод образуют в протоплазме бактериальной клетки соединение, которое прочно удерживается некоторыми бактериями при обесцвечивании их спиртом. Такие бактерии остаются окрашенными в сине-фиолетовый цвет (грамположительные бактерии). Другие же обладают свойством удерживать краску, и при обработке обесцвечиваются (грамотрицательные микробы).

Различное отношение к окраске по Граму зависит от разницы в физико-химическом составе микробных клеток.

Техника окраски по Граму

1.На фиксированный мазок кладут небольшой кусок фильтровальной бумаги и наливают раствор генциан-виолета. Через 2 минуты полоску фильтровальной бумаги удаляют. Сливают краску.

3.Препарат обесцвечивают спиртом, наливая его на мазок на 20-30 секунд. Препарат необходимо покачивать и сменять спирт, или погружают мазок в стаканчик со спиртом 2-3 раза ( до отхождения фиолетовых струек краски).

4.Препарат промывают водой.

5.Окрашивают водным раствором фуксина в течении 1- 2 минут.Сливают краску,промывают водой.

7.Высушивают фильтровальной бумагой, исследуют с иммерсионной системой.

Грамположительные микробы Гр(+) при окраске генцианвиолетом приобретают тёмный сине-фиолетовый цвет

Грамотрицательные Гр(-)окрашиваются дополнительно фуксином в красный цвет

Чтобы получить правильную окраску, рекомендуется употреблять для окраски по Граму свежие (суточные) культуры микробов. Окраска старых культур даёт непостоянные результаты.

Отношение различных видов бактерий к способу окраски по Граму:

Все патогенные кокки (шаровидные) являются грамположительнымиГр(+)

Исключениегоноккок и менингококк –ГрамотрицательныеГР(-)

Извитыеформы микробов (вибрионы,спирохеты) –Грам отрицательныеГр(-)

Палочковидныебывают грамположительные и грамотрицательныеГр(+),Гр(-)

Спорогенные бациллыв большинстве грамположительныеГр(+)

На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть картинку На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Картинка про На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму

Прижизненная окраска микробов.

Прижизненной(витальной) окраской называется такая, при которой клетки микробов прокрашиваются в живом состоянии.

Для прижизненной окраски микробов применяют наименее ядовитые краски(мителеновая синяя, нейтральная красная, везувин) в малых концентрациях (от 0,1% до 0,001%).

Одним из простых способов является следующий: на чистое предметное стекло наливают насыщенный водный раствор мителеновой синей, дают ему высохнуть и затем чистой сухой ветошью(или фильтрованной бумагой) протирают стекло, пока налёт краски на нём не примет светло-голубого оттенка. Затем на стекло наносят каплю исследуемого материала и накрывают её покровным стеклом. При микроскопировании можно видеть, как микробы постепенно окрашиваются в голубой цвет, оставаясь живыми (например, не теряя своей подвижности).

Можно воспользоваться более грубым способом: каплю исследуемого материала смешивают на предметном стекле с краской (0,1%-0,01 %), накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом.

Источник

Микробиология. Окраска по Граму: красители, проведение, результаты

В микробиологии окраска по Граму имеет большое значение. Ее применяют для диагностики инфекционных заболеваний, выявления патогенности бактерий. Метод позволяет определить сходные по форме и размеру бактерии, которые относятся к различным видам и родам.

Особенности окраски

На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть картинку На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Картинка про На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму

Окраска бактерий по Граму – сложный метод, в котором применяют два вида окраса: основной и дополнительный. В процессе выполнения манипуляции применяют обесцвечивающие вещества, к которым относятся спирты и кислоты.

На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть картинку На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Картинка про На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму Вам будет интересно: Какая у вас степень владения языком?

В микробиологии окраску по Граму проводят трифенилметановой группой красителей. К ней относятся генциановые, метиловый синий, кристаллвиолет. Разные виды бактерий дают разные окрасы, образуя прочные соединения с красителями.

На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть картинку На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Картинка про На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму

Окрасы

В микробиологии окраска по Граму бывает двух видов: грамположительная и грамотрицательная. В первом случае микроорганизмы дают прочные соединения с красителями и йодом. Во время анализа они не обесцвечиваются при воздействии со спиртом, из-за чего не изменяют своего первоначального фиолетового оттенка.

Грамотрицательные окрасы образуются при воздействии с йодом и легко разрушаются под действием йода. В результате микробы обесцвечиваются, а затем приобретают красный оттенок.

Подготовка материала

По правилам микробиологии, окраска по Граму требует предварительной подготовки материалов. Его необходимо распределить тонким слоем по поверхности стекла. Затем мазок подсушивают и после полного высыхания фиксируют. При этом мазок закрепляется на стекле, что позволяет исключить смывание бактерий красителями. К тому же мертвые микроорганизмы окрашиваются лучше, чем живые.

После подготовки материала подбирают метод окрашивания: физический или химический. Первый предполагает воздействие высокой температуры на микробную клетку. Во время химического способа применяют различные химические вещества, которые вызывают коагуляцию протеинов цитоплазмы.

Подготавливают набор для окраски по Граму, предметные стекла с бактериями. Их берут пинцетом или аккуратно пальцами за ребра мазком вверх, затем проводят пару раз над верхом пламени горелки. Процесс должен занимать пару секунд.

Процесс фиксации химическим методом предполагает использование ацетона, спирта, специальных смесей, жидкость Карнуа. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в фиксирующее вещество на пятнадцать минут, затем просушивают на воздухе.

На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть картинку На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Картинка про На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму

Окрашивание

Окраска мазков по Граму проводится по определенному алгоритму.

Чтобы определить, есть ли в мазке грамотрицательные бактерии, проводят дополнительно окрашивание фуксином или сафранином. Препараты наносят на две минуты. В конце процедуры стекло промывают, высушивают.

На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть картинку На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Картинка про На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму

Результаты

Все грамположительные микроорганизмы окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, а грамотрицательные – в красный. Шарообразные формы обычно относятся к грамположительным видам, а извитые формы – отрицательно окрашиваются. Палочковидные бактерии могут быть грамотрицательными и грамположительными.

Чтобы получить максимально достоверные результаты исследований, рекомендуется применять суточные культуры, а также свежеприготовленные растворы для окрашивания.

Механизм окраски позволяет увидеть и оценить физико-химические особенности строения цитоплазмы, клеточные стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. У первых содержится много рибонуклеиновой кислоты, белков в цитоплазме, а в клеточных стенках – пептидогликана. Из-за этого во время обработки мазков генцианвиолетом и Люголем у грамположительных видов бактерий образуется прочное соединение ионов йода и красителя.

При обработке спиртами грамположительные микроорганизмы удерживают краситель, а грамотрицательные – обесцвечиваются и окрашиваются дополнительно разведенным фуксином в красный оттенок. Некоторые бактерии способны окрашиваться только на стадии роста.

На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть картинку На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Картинка про На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму

Применение

Окраску по Граму проводят при анализе вида микроорганизмов в мазках из влагалища и слюны. Этот способ позволяет определить вид микроорганизмов в кале, в плевральной, перитонеальной жидкости и не только. Любые жидкости, где могут содержаться бактерии, исследуют данным методом. После проведения окрашивания врачи подбирают метод лечения, назначая препараты, способные воздействовать на грамположительные или грамотрицательные бактерии.

Источник

Методика окраски по Граму: подготовка, проведение, оценка результата

Методика окраски по Граму – экспресс-метод, позволяющий определить вид бактерий. Технология выявления патогена разработана бактериологом Гансом Грамом. Он был необычным человеком, скромным. В своей работе он сказал: «Я публикую методику окраски, заведомо зная, что она имеет некоторые недостатки, но я не теряю надежды, что мой метод будет доработан и станет полезным». Так и произошло. Его технология стала одной из ведущих при определении типа бактерий. Методика окраски по Граму основана на строении прокариот, из-за чего бактерии приобретают тот или иной оттенок.

На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть картинку На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Картинка про На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму Вам будет интересно: Обучение финансовой грамотности в школе

На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть картинку На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Картинка про На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму

На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть картинку На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Картинка про На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму

Рекомендации

Прежде чем приступить к окрашиванию, необходимо подготовить рабочее место и образец. От качества последнего зависит, насколько хорошим будет результат. К примеру, для анализа берут мокроту глубокого кашля, а не просто слюну.

При работе с образцами обязательно соблюдаются правила безопасности. Во время работы на руках должны быть перчатки. Также стоит быть внимательным при работе со спиртом, ацетоном. Эти вещества огнеопасны и легко воспламеняются при нагревании.

При работе с предметными стеклами их берут аккуратно пинцетом или двумя пальцами за боковые края так, чтобы не трогать мазок.

На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть картинку На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Картинка про На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму

Подготовка к работе

Начинается методика окраски по Граму с подготовки себя к предстоящей работе. На руки обязательно надеваются стерильные перчатки, длинные волосы должны быть убраны, подвязаны. Рабочее место должно располагаться в стерильном, хорошо проветриваемом помещении. Перед проведением манипуляции обязательно проверяется работоспособность микроскопа.

Следующим шагом будет подготовка предметных стекол. Если они недостаточно чистые, то стекла промывают под проточной водой с мылом. Это поможет удалить грязь, жир. Обязательно поверхность обрабатывается спиртом или другим способом, используемым в лаборатории.

Подготовка образца

Методика окраски по Граму предполагает подготовку образца. Для этого берут предметное стекло и на его центр аккуратно помещают образец. Методика окраски мазков по Граму дает возможность увидеть тип бактерий, культивируемых в чашке Петри.

Для начала работы на стекло наносят тонкий слой исследуемой жидкости. Не стоит ждать более суток от начала забора материала до проведения анализа, так как у многих патогенов разрушается клеточная стенка, и реакция на окрашивание становится совершенно непредсказуемой. Если же предполагается начать исследование тканей, то на предметное стекло стоит нанести пару капель материала. Жидкость распределяется по стеклу ровным слоем ребром другого стекла. Образцу дают подсохнуть.

Если для окраски берут образец из чашки Петри, то процедуру забора материала проводят петлей. А при исследовании мазка его прижимают к предметному стеклу другим стеклом.

На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть картинку На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Картинка про На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму

Фиксация образца

Методика окраски препарата по Граму предполагает фиксацию образца. Под действием тепла бактерии пристают к стеклу и не смываются.

Для того чтобы закрепить мазок, необходимо провести над горелкой предметное стекло. Нельзя перегревать стекло, чтобы в образце не появилось изменений.

Можно зафиксировать образец метанолом. Для этого на стекло необходимо нанести пару капель метилового спирта, а излишки слить. Стекло просушивается естественным способом. Этот метод предпочтительнее из-за того, что он меньше повреждает исследуемые клетки и показывает более чистый фон.

На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть картинку На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Картинка про На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму

Окрашивание

Методика приготовления мазка препаратов окраски по Граму предполагает окрашивание в емкости, в которую будет помещен образец. Обычно для этого используется лоток или стеклянное блюдце. В него помещают предметное стекло с препаратом так, чтобы жидкость стекала в лоток.

Сначала на образец наносится раствор кристаллического фиолетового или генцианово-фиолетового. Его набирают в пипетку и несколько капель наносят на препарат. Через минуту проводят оценку результата. Все грамположительные патогены окрасятся в фиолетовый цвет.

Затем краситель смывают водой так, чтобы она слегка обмыла мазок. Далее на образец наносится йод и оставляется на минуту. После этого его так же аккуратно смывают. После этой процедуры на стекло наносится обесцвечивающее вещество. Это может быть раствор ацетона и спирта. Раствором обрабатывают мазок до тех пор, пока не исчезнет фиолетовый оттенок.

На мазок наносится контрастный краситель. Это может быть фуксин или сафран. Он позволяет создать контраст между грамотрицательными и грамположительными бактериями. В результате воздействия препарата грамотрицательные патогены окрашиваются в фуксиевый цвет. Краситель смывают водой.

Завершающим этапом является просушивание предметного стекла. После этого методика окраски по Граму (в микробиологии она используется довольно часто) считается завершенной.

На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Смотреть картинку На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Картинка про На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму. Фото На чем основано различие в восприятии окраски при использовании метода по граму

Оценка результатов

Предметное стекло помещают под микроскоп. Грамположительные бактерии в мазке будут окрашены в фиолетовый цвет. Грамотрицательные бактерии окрасятся в розовый или красный оттенок. Такое разнообразие возникает в результате особенности строения стенок патогенов. В одни проникает только фиолетовый краситель, а в другие – фуксиевый.

К ошибочному результату может привести длительное нахождение предметного стекла под действием обесцвечивающей жидкости. Поэтому процедуру проводят дважды, чтобы убедиться в правильности диагноза. Повторный анализ позволяет удостовериться, что окраска проведена правильно.

Во время работы с патогенными микроорганизмами всегда соблюдайте осторожность, так как от этого зависит ваше здоровье.

Источник

Окраска по Граму

Метод Грама — метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. Предложен в 1884 году датским врачом Г. К. Грамом.

По Граму бактерии окрашивают осно́вными красителями — генциановым или метиловым фиолетовым и др., затем краситель фиксируют раствором йода. При последующем промывании окрашенного препарата спиртом те виды бактерий, которые оказываются прочно окрашенными, называют грамположительными бактериями (обозначаются Грам (+)), — в отличие от грамотрицательных (Грам (−)), которые при промывке обесцвечиваются.

Содержание

Использование в диагностике

Окраска по Граму имеет большое значение в систематике бактерий, а также для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.

Грамположительны кокковые и спороносные формы бактерий, а также дрожжей, они окрашиваются в иссиня-чёрный (тёмно-синий) цвет.

Грамотрицательны многие неспороносные бактерии, они окрашиваются в красный цвет, ядра клеток приобретают ярко-красный цвет, цитоплазма — розовый.

Техника проведения окраски

Окраска по Граму относится к сложному способу окраски, когда на мазок воздействуют двумя красителями, из которых один является основны́м, а другой — дополнительным. Кроме красящих веществ при сложных способах окраски применяют обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты и др.

Для окраски по Граму чаще используют красители трифенилметановой группы: генциановый, метиловый фиолетовый или кристаллвиолет. Грамположительные Грам (+) микроорганизмы дают прочное соединение с указанными красителями и йодом. При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином Грам (+) микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет.

Грамотрицательные Грам (−) микроорганизмы образуют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, и затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет.

Подготовка материала для окраски

Исследуемый материал распределяют тонким слоем по поверхности хорошо обезжиренного предметного стекла. Приготовленный мазок высушивают на воздухе и после полного высыхания фиксируют. Гистологические срезы готовят по рутинной методике, фиксируя кусочки тканей в формалине и заливая в парафин.

Фиксация

При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые.

Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение химических средств, вызывающих коагуляцию белков цитоплазмы.

Физический способ фиксации

Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за рёбра мазком кверху и плавным движением проводят 2—3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с.

Надёжность фиксации проверяют следующим приёмом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной поверхности левой кисти. При правильном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога (70—80 °С).

Химический способ фиксации

Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова (смесь этилового спирта 96 % и наркозного эфира в соотношении 1:1), жидкость Карнуа (этилового спирта 96 % — 60 %, хлороформа 30 %, ледяной уксусной кислоты 10 %). Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10—15 минут и затем высушивают на воздухе.

Процесс окрашивания мазков

Техника окраски бактерий в гистологических срезах по Граму-Вейгерту

Результат: грамположительные бактерии сине-черные, фибрин фиолетовый, ядра красные.

См. также

Ссылки

На немецком языке

На английском языке

Полезное

Смотреть что такое «Окраска по Граму» в других словарях:

окраска по Граму — Специальная система окраски бактерий, позволяющая дифференцировать строение бактериальной стенки [http://www.dunwoodypress.com/148/PDF/Biotech Eng Rus.pdf] Тематики биотехнологии EN Gram stain … Справочник технического переводчика

Окраска микроорганизмов — (крашение микробов) комплекс методов и приёмов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в прикладной… … Википедия

окраска дифференциальная — специальные приемы окраски, позволяющие различать микроорганизмы сходной формы, размеров, но относящиеся к различным видам. Напр., окраска по Граму. (Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.) … Словарь микробиологии

Окраска микроорганизмов — один из широко применяемых методов микробиологической техники (См. Микробиологическая техника), заключающийся в окраске фиксированных клеток микроорганизмов специальными красителями. Вначале в каплю воды, находящуюся на предметном или… … Большая советская энциклопедия

ОКРАСКА — (микроорганизмов). Мазок на предметном или покровном стекле высушивается на воздухе; высушивание над пламенем не рекомендуется, допускается лишь помещение препарата вблизи пламени. Высушенный препарат фиксируется троекратным проведением через… … Большая медицинская энциклопедия

окраска бактерий по Граму — метод дифференциальной окраски клеток прокариот, разработанный датским микробиол. X. Громом в 1884 г. Заключается в последовательной обработке мазка клеток основными красителями (напр., кристаллическим фиолетовым) и иодом и последующем отмывании… … Словарь микробиологии

ОКРАСКА МИКРООРГАНИЗМОВ — окраска микроорганизмов, метод бактериологического исследования, применяемый для обнаружения и изучения микробов при микроскопировании препаратов. Последние могут быть приготовлены из культур микробов или нативного материала — тканей органов … Ветеринарный энциклопедический словарь

Окрашивание по Граму — Метод Грама метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. Предложен в 1884 году датским врачом Г. К. Грамом. По Граму бактерии окрашивают основными… … Википедия

Грама окраска — см. окраска бактерий по Граму. (Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.) … Словарь микробиологии

Крашение микробов — Окраска микроорганизмов (крашение микробов) комплекс методов и приемов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в… … Википедия

Источник

Грама метод

Метод Грама — метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. Предложен в 1884 году датским врачом Г. К. Грамом.

По Граму бактерии окрашивают осно́вными красителями — генциановым или метиловым фиолетовым и др., затем краситель фиксируют раствором йода. При последующем промывании окрашенного препарата спиртом те виды бактерий, которые оказываются прочно окрашенными, называют грамположительными бактериями (обозначаются Грам (+)), — в отличие от грамотрицательных (Грам (−)), которые при промывке обесцвечиваются.

Содержание

Использование в диагностике

Окраска по Граму имеет большое значение в систематике бактерий, а также для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.

Грамположительны кокковые и спороносные формы бактерий, а также дрожжей, они окрашиваются в иссиня-чёрный (тёмно-синий) цвет.

Грамотрицательны многие неспороносные бактерии, они окрашиваются в красный цвет, ядра клеток приобретают ярко-красный цвет, цитоплазма — розовый.

Техника проведения окраски

Окраска по Граму относится к сложному способу окраски, когда на мазок воздействуют двумя красителями, из которых один является основны́м, а другой — дополнительным. Кроме красящих веществ при сложных способах окраски применяют обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты и др.

Для окраски по Граму чаще используют красители трифенилметановой группы: генциановый, метиловый фиолетовый или кристаллвиолет. Грамположительные Грам (+) микроорганизмы дают прочное соединение с указанными красителями и йодом. При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином Грам (+) микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет.

Грамотрицательные Грам (−) микроорганизмы образуют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, и затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет.

Подготовка материала для окраски

Исследуемый материал распределяют тонким слоем по поверхности хорошо обезжиренного предметного стекла. Приготовленный мазок высушивают на воздухе и после полного высыхания фиксируют. Гистологические срезы готовят по рутинной методике, фиксируя кусочки тканей в формалине и заливая в парафин.

Фиксация

При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые.

Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение химических средств, вызывающих коагуляцию белков цитоплазмы.

Физический способ фиксации

Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за рёбра мазком кверху и плавным движением проводят 2—3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с.

Надёжность фиксации проверяют следующим приёмом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной поверхности левой кисти. При правильном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога (70—80 °С).

Химический способ фиксации

Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова (смесь этилового спирта 96 % и наркозного эфира в соотношении 1:1), жидкость Карнуа (этилового спирта 96 % — 60 %, хлороформа 30 %, ледяной уксусной кислоты 10 %). Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10—15 минут и затем высушивают на воздухе.

Процесс окрашивания мазков

Техника окраски бактерий в гистологических срезах по Граму-Вейгерту

Результат: грамположительные бактерии сине-черные, фибрин фиолетовый, ядра красные.

См. также

Ссылки

На немецком языке

На английском языке

Полезное

Смотреть что такое «Грама метод» в других словарях:

ГРАМА МЕТОД — ГРАМА МЕТОД, предложенный Грамом в 1884 году и получивший широкое распространение метод окраски определенных видов бактерий, состоящий в том, что препарат перекрашивается розанилиновой краской (Methylviolett, Krystallviolett, Gentian violett,… … Большая медицинская энциклопедия

Грама метод — метод дифференцированной окраски бактерий, при к ром одни бактерии окрашиваются в темно фиолетовый цвет (грамположительные бактерии, см.), др. в красный или розовый (грамотрицателъные бактерии,см.). Сущность метода состоит в том, что клеточная… … Словарь микробиологии

ГРАМА МЕТОД — (по имени дат. врача X. К. Грама, H. Ch. Gram, предложен в 1884), дифференциальная окраска бактерий. Применяется для окраски бактерий в мазках из культур, экссудатов, тканей и др. Фиксированный на пламени мазок окрашивают 1% ным раствором… … Ветеринарный энциклопедический словарь

Грама метод — (Н. Ch. J. Gram, 1853 1938, датский бактериолог, фармаколог и врач) дифференциально диагностический метод окраски бактерий путем последовательной обработки фиксированного мазка красителями трифенилметановой группы (генциановым фиолетовым и др.),… … Большой медицинский словарь

Грама метод — предложенный в 1884 датским врачом Х. К. Грамом (Н. Ch. Gram) метод дифференциальной окраски бактерий. По Г. м. бактерии окрашивают основными красителями генциановым или метиловым фиолетовым и др., затем краситель фиксируют раствором иода … Большая советская энциклопедия

Метод Грама — Грамположительная Bacillus anthracis (фиолетовые палочки) в образце cпинномозговой жидкости. (Другие клетки лейкоциты) … Википедия

Метод Крамера — (правило Крамера) способ решения квадратных систем линейных алгебраических уравнений с ненулевым определителем основной матрицы (причём для таких уравнений решение существует и единственно). Назван по имени Габриэля Крамера (1704–1752),… … Википедия

ОКРАШИВАНИЕ ГРАМА — ОКРАШИВАНИЕ ГРАМА, в микробиологии метод контрастного окрашивания, названный по имени датского врача Ганса Кристиана Грама (1853 1938). Он помогает при распределении по категориям и распознавании БАКТЕРИЙ, которые считаются грам положительными и… … Научно-технический энциклопедический словарь

Грамм-положительные бактерии — Метод Грама метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. Предложен в 1884 году датским врачом Г. К. Грамом. По Граму бактерии окрашивают основными… … Википедия

Источник

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *