на какую специальную среду засевают жидкость для обнаружения сальмонелл методом смывов

На какую специальную среду засевают жидкость для обнаружения сальмонелл методом смывов

4.2. Биологические и микробиологические факторы

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ, ОБНАРУЖЕНИЕ САЛЬМОНЕЛЛ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Дата введения 2010-09-02

1. Методические указания разработаны ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора (С.Ш.Рожнова, А.Т.Подколзин).

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 13.08.2010 г.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы специалистами организаций здравоохранения и других заинтересованных организаций.

1.2. В настоящих методических указаниях определен порядок проведения лабораторных исследований в целях обнаружения сальмонелл в клиническом материале, пищевых продуктах и объектах окружающей среды.

1.3. Настоящие методические указания распространяются только на лаборатории, имеющие право на работу с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и удовлетворяющие требованиям к помещениям и оборудованию в соответствии с СанПиН 1.3.2322-08.

2. Термины и сокращения

3. Нормативные ссылки

ГОСТ Р 52814-2007 (ИСО 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella.

ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологического анализа.

ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологического анализа.

ГОСТ Р 50455-92 Мясо и мясные продукты. Обнаружение сальмонелл (арбитражный метод).

ГОСТ Р 51448-99 (ИСО 3100-2-88) Мясо и мясные продукты. Методы подготовки проб для микробиологических исследований.

ГОСТ 9792-73 «Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб».

ГОСТ 7702.20-95 «Субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб».

ГОСТ Р 52833-2007 (ИСО 22174-2005). Микробиология пищевой продукции и кормов для животных. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Общие требования и определения.

ГОСТ 30705-2000 «Продукты молочные для детского питания. Методы микробиологического анализа».

МУ 4.2.1884-04 Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов.

МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов».

МУ 1.3.1888-04* «Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III-IV групп патогенности».

Информационное письмо МЗ РСФСР N 10/11-3223 от 28.08.1987 г.

«Методы контроля бактериологических питательных сред». Методические указания. МУК 4.2.2316-08.

«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08.

«Методы контроля. Бактериологические и микробиологические факторы. Техника сбора и транспортировки биоматериала в микробиологические лаборатории» МУ 4.2.2039-0.

Инструкция по применению набора реагентов «Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный О-антигенный жидкий» от 22.08.2008 N 6854-Пр/08.

«Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» СанПиН 2.3.2.1078-01.

«Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений» CП 2.1.7.728-99*.

Laboratory Protocol «Isolation of Salmonella spp. From Food and Animal Faeces» 5 Ed June 2010. WHO Global Foodborhe Infections Network.

Antigenic formulae of the Salmonella serovars, 2007, 9 edition WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Salmonella.

4. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы

4.1. Аппаратура и инструментарий

Наименование аппаратуры и материалов

Названия нормативных документов (ГОСТ, ТУ)

Анализатор потенциометрический, погрешность измерений pH±0,01

Шкаф сушильный стерилизационный ШСС-80П или других марок, позволяющий поддерживать температуру (160±5) °С

Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру 37 °С с отклонением от заданной ±1 °С

Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру 41,5 °С с отклонением от заданной ±1 °С

Весы лабораторные общего назначения, 2 и 4 класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г

Микроскоп биологический МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, МБР-1, МБР-3, МБС

Стерилизаторы паровые медицинские или аналогичные

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды в соответствии с

Гомогенизатор перистальтического типа «Микс-2», «Стомайкер», или других наименований

AES Lab., Cat.N AESAP 1066

Гомогенизатор типа «вортекс»

Микропипетки на 200-1000 мкл

BIOHIT, Cat.N 720040 или «Ленпипет»

Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 или других видов

Холодильник бытовой электрический

Скальпель хирургический, 15 см

Часы механические сигнальные

Аппарат универсальный для встряхивания жидкости в колбах и пробирках (или другая аппаратура для встряхивания)

4.2. Лабораторная посуда и материалы

Бумага фильтровальная лабораторная

Колбы плоскодонные конические или круглые разной вместимости

Вата медицинская гигроскопическая

Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 см

Пробирки типов II1, II2

Стекла предметные для микропрепаратов

Спиртовки лабораторные стеклянные

Термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 до 100 °С (цена деления шкалы 1 °С)

Чашки биологические (Петри) или одноразовые из полимерных материалов

Пакеты стерильные для гомогенизатора

AES Lab., Cat.N AES400/50G

Отраслевой стандарт для визуальной оценки мутности N 10

ГИСК
им. Л.А. Тарасевича,
МЗ РФ

Источник

На какую специальную среду засевают жидкость для обнаружения сальмонелл методом смывов

Об актуальных изменениях в КС узнаете, став участником программы, разработанной совместно с АО «Сбербанк-АСТ». Слушателям, успешно освоившим программу выдаются удостоверения установленного образца.

Программа разработана совместно с АО «Сбербанк-АСТ». Слушателям, успешно освоившим программу, выдаются удостоверения установленного образца.

Обзор документа

Методические указания МУ 4.2.2723-10 «Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 13 августа 2010 г.)

Методические указания МУ 4.2.2723-10
«Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды»
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 13 августа 2010 г.)

Дата введения: 2 сентября 2010 г.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы специалистами организаций здравоохранения и других заинтересованных организаций.

1.2. В настоящих методических указаниях определен порядок проведения лабораторных исследований в целях обнаружения сальмонелл в клиническом материале, пищевых продуктах и объектах окружающей среды.

1.3. Настоящие методические указания распространяются только на лаборатории, имеющие право на работу с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и удовлетворяющие требованиям к помещениям и оборудованию в соответствии с СанПиН 1.3.2322-08.

2. Термины и сокращения

3. Нормативные ссылки

ГОСТ Р 52814-2007 (ИСО 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella.

ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологического анализа.

ГОСТ 26669-85. Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологического анализа.

ГОСТ Р 50455-92 Мясо и мясные продукты. Обнаружение сальмонелл (арбитражный метод).

ГОСТ Р 51448-99 (ИСО 3100-2-88) Мясо и мясные продукты. Методы подготовки проб для микробиологических исследований.

ГОСТ 9792-73 «Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб».

ГОСТ 7702.20-95 «Субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб».

ГОСТ Р 52833-2007 (ИСО 22174-2005). Микробиология пищевой продукции и кормов для животных. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Общие требования и определения.

ГОСТ 30705-2000 «Продукты молочные для детского питания. Методы микробиологического анализа».

МУ 4.2.1884-04 Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов.

МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов».

МУ 1.3.1888-04 «Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III-IV групп патогенности».

Информационное письмо МЗ РСФСР № 10/11-3223 от 28.08.1987 г.

«Методы контроля бактериологических питательных сред». Методические указания. МУК 4.2.2316-08.

«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08.

«Методы контроля. Бактериологические и микробиологические факторы. Техника сбора и транспортировки биоматериала в микробиологические лаборатории» МУ 4.2.2039-05.

Инструкция по применению набора реагентов «Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный О-антигенный жидкий» от 22.08.2008 № 6854-Пр/08.

«Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» СанПиН 2.3.2.1078-01.

«Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений» СП 2.1.7.728-99.

Приказ № 535 от 22 апреля 1985 г. «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».

Laboratory Protocol «Isolation of Salmonella spp. From Food and Animal Faeces» *Ed June 2010. WHO Global Foodborhe Infections Network.

Antigenic formulae of the Salmonella serovars, 2007, *edition WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Salmonellа.

4. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы

4.1. Аппаратура и инструментарий

4.2. Лабораторная посуда и материалы

4.3. Реактивы и питательные среды

5. Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы

5.1. Средства измерений и вспомогательное оборудование

5.1.1. Центрифуга лабораторная

5.1.2. Шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий постоянство температуры *°С по НД

5.1.3. Шкаф холодильный любого типа, обеспечивающий постоянство температуры по НД

5.1.5. Дозаторы пипеточные по ТУ 64-16-55-90 с диапазоном объема доз 20-200 мкл, 200-1000 мкл и дискретности установки доз 5 мкл

5.1.6. Дистиллятор тип ДЭ-4-2 по НД

5.1.8. Гомогенизатор ножевой или перистальтический типа «Стомайкер»

5.1.9. Ступки фарфоровые с пестиками

5.2. Лабораторная посуда и инструменты

5.2.1. Посуда мерная лабораторная по ГОСТ 1770-74; цилиндры исполнения 2 вместимостью 1000 *, цилиндры исполнения 3 вместимостью 25 * и 100 *, пробирки исполнения 1 вместимостью 10 *, колбы исполнения 2 вместимостью 100 *, 500 * и 1000 *.

5.2.4. Пинцеты, скальпели, ножницы.

5.2.5. Автоматические пипетки на 50, 100 мкл и 1 мл, с наконечниками

5.3.Перечень рекомендуемого оборудования для проведения ПЦР-исследований*

иологической безопасности II тип А).

5.3.1. Ламинарный бокс (например, «БАВп-01-«Ламинар-С»-1,2″, «Ламинарные системы», Россия, класс б

5.3.2. Программируемый амплификатор (например, «Терцик» («ДНК-Технология», Россия), «Gradient Palm Cycler» («Corbett Research», Австралия), «MAXYGENE» («Axygen», США), «GeneAmp PCR System 2700» («Applied Biosystems») или аналогичные).

5.3.4. Флуоресцентный ПЦР-детектор (например, «AЛА-1/4» («BioSan», Латвия), «Джин» («ДНК-Технология», Россия) или аналогичные).

5.3.5. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100°С (например, «ТЕРМО 24-15», «Биоком», Россия).

5.3.6. Микроцентрифуга для пробирок типа «Эппендорф» до 16 тыс об/мин (например, «MiniSpin», «Eppendorf», Германия).

5.3.7. Вортекс (например, «ТЭТА-2», «Биоком», Россия).

5.3.8. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления надосадочной жидкости (например, «ОМ-1», г. Ульяновск, Россия).

5.3.9. Набор электронных или механических дозаторов переменного объема (например, «Ленпипет», Россия).

5.3.10. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся микропробирки на 1,5 мл (например, «Axygen», США).

5.3.11. Штативы для наконечников (например, «Axygen», США) и микропробирок на 1,5 мл (например, «ИнтерЛабСервис», Россия).

5.3.12. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл (например, «Axygen», США).

5.3.13. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с аэрозольным барьером до 200 мкл и до 1000 мкл (например, «Axygen», США).

5.3.14. Холодильник от 2 до 8°С с морозильной камерой не выше минус 16°С.

5.3.15. Отдельный халат и одноразовые перчатки.

5.3.16. Емкость с дезинфицирующим раствором.

5.3.17. Камера для горизонтального электрофореза объёмом не более 400 мл (например, «SE-2», «Хеликон», Россия).

5.3.18. Источник постоянного тока с напряжением 150-460 В (например, «Эльф-4», «ДНК-Технология», Россия).

5.3.19. Ультрафиолетовый трансиллюминатор с кабинетом для просмотра гелей (например, «Биоком», Россия).

5.3.20. Видеосистема с цифровой камерой для регистрации результатов и передачи изображения (например, «Биотест-1», ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Россия; «BioRad», США).

5.3.21. Аквадистиллятор. (например ДЭ-4-2Э, Завод медицинского оборудования, г.Саранск.)

5.3.22. Микроволновая печь для плавления агарозы.

5.3.23. Колба коническая из термостойкого стекла (ГОСТ 21400-75) для плавления агарозы на 250 мл.

5.3.24. Мерный цилиндр на 1 л (ГОСТ 1770-74).

5.3.25. Пластиковая ёмкость на 5 л для дезактивации буфера и гелей, содержащих бромид этидия.

6. Общие положения

Лабораторным критерием диагноза является выделение возбудителя (сальмонеллы) из испражнений, мочи, крови, рвотных масс и промывных вод больных, а при необходимости и наличии специальных показаний и из желчи, дуоденального содержимого, спинномозговой жидкости и секционного материала.

В особых случаях (вспышки сальмонеллезов) диагноз может быть поставлен на основе клинико-эпидемиологических данных с дополнительными позитивными результатами серологических и молекулярно-генетических исследований.

Таксономия и культурально-ферментативные свойства сальмонелл

Сальмонеллы вида S.enterica делятся на несколько подвидов и обозначаются следующими символами:

Для представителей других подвидов вида S.enterica введены следующие обозначения:

1. Salmonellа ser Typhimurium

2. Salmonellа Typhimurium

Серовары других подвидов вида S.enterica и вида S.bongori обозначаются номером подвида и их антигенной формулой:

Это значит, что штамм с такой антигенной характеристикой относится к виду enterica subsp. salamae;

Сальмонеллы каждого подвида разделяются на серологические варианты по О- и Н- антигенной характеристике.

Современная схема Кауфмана-Уайта насчитывает 2579 серологических вариантов (2007 г., девятое издание).

Число сероваров сальмонелл, входящих в каждый подвид:

Они являются факультативными анаэробами, хорошо растут на обычных питательных средах, за исключением нескольких сероваров (S.Paratyphi A, S.Choleraesuis, S.Typhisuis, S.Sendai, S.Gallinarum и некоторых других). Оптимальной температурой роста является 37°С, реакция среды слабощелочная (рН 7,2-7,4).

При более низкой температуре (20°С) или более высокой (42°С) и при более кислой или более щелочной реакции среды (рН от 4,1 до 9,0) они способны размножаться, но значительно медленнее, чем при оптимальных условиях. При температуре ниже 5°С их рост полностью прекращается.

Сальмонеллы обладают сравнительно высокой степенью устойчивости к воздействию различных факторов внешней среды. В жидкой среде при прогревании до 70°С они погибают через 5-10 минут, а при кипячении моментально.

В то же время они хорошо сохраняются в различных пищевых продуктах (молоке, мясе, на поверхности и внутри яиц и др.). Соление и копчение оказывают на сальмонеллы относительно слабое действие.

Факторами передачи возбудителей инфекции при сальмонеллезах являются, как правило, продукты животного происхождения, в том числе молоко и молочные продукты. В настоящее время чаще всего заболевания возникают при употреблении в пищу инфицированных яиц или продуктов, в состав которых входят яйца, в том числе кремово-кондитерских изделий. Ряд заболеваний связан с инфицированным сальмонеллами мясом и мясопродуктами. Чаще всего это мясо домашних птиц (куры, утки, гуси, индейки), а также крупного рогатого скота и свинина, которые нередко являются причиной заболевания людей сальмонеллезом.

Известны вспышки сальмонеллеза, связанные с употреблением рыбы и рыбных продуктов, в том числе рыбы горячего копчения и сельди пряного посола, хотя доля их в общем числе вспышек сальмонеллезной этиологии невелика.

Наибольшую опасность как возможные факторы передачи возбудителя инфекции представляют такие продукты и блюда, которые после приготовления не подвергаются термической обработке и могут храниться длительное время, в том числе и при комнатной температуре.

Необходимо учитывать, что в качестве факторов передачи возбудителя инфекции при сальмонеллезах могут оказываться продукты питания, инфицированные небольшими дозами сальмонелл.

Так, известны отдельные случаи заболевания сальмонеллезами и даже вспышки, когда заражающая доза не превышала несколько десятков микроорганизмов.

Следует учитывать и то, что даже при интенсивном размножении сальмонелл в пищевых продуктах они не изменяют ни вкуса, ни запаха, ни их внешнего вида.

Основными критериями эпидемиологической значимости определенных продуктов питания является обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах или других объектах внешней среды.

Следует подчеркнуть, что в последние 20 лет во всем мире и в нашей стране широко распространилась Salmonella Enteritidis. Представители этого серовара вызывают пищевые вспышки сальмонеллеза при низкой дозе указанных микроорганизмов в продукте, а заболевания отличаются, как правило, более манифестным клиническим течением.

В настоящее время известны ряд схем, используемых в различных странах для выделения сальмонелл. В идеале для этого должны быть выбраны высокочувствительные и специфичные методы. В то же время эти методы должны быть простыми, быстрыми и недорогими.

Сложности с выделением сальмонелл связаны с наличием в кишечной флоре * конкурентных микроорганизмов 300-400 видов, травмированием клеток при их транспортировке, перемежающимся выделением с испражнениями. Для преодоления этого при выделении сальмонелл обязательно используются среды обогащения.

Рекомендуемые в настоящее время стандартные приемы выделения сальмонелл должны соответствовать ISO-6579, однако не исключается возможность использования и некоторых других методов.

7. Показания к исследованию

Исследование на сальмонеллез проводят с целью диагностики заболеваний, выявления сальмонеллоносительства, определения соответствия гигиеническим требованиям безопасности пищевых продуктов, выявления обсемененности объектов внешней среды, а также при расследовании вспышек сальмонеллезов с целью установления источников и факторов передачи возбудителей инфекции.

8. Исследование клинического материала

8.1. Взятие и транспортировка

В случае невозможности доставки в установленные сроки материал посылают в консерванте или в транспортной среде. Такой материал до исследования хранят при 4-6°С не более 24 ч.

При отборе проб необходимо исключить возможность контаминации их за счет смежных областей кожи, других органов, внешней среды и т.п.

8.1.3. Испражнения собирают сразу после дефекации с помощью стерильной стеклянной палочки или деревянного шпателя. При наличии патологических примесей (слизь, кровь, гной и т.п.) их включают в отбираемую пробу. В случае невозможности получения испражнений после дефекации материал берут непосредственно из прямой кишки с помощью «зонд тампона», вводя его в кишку на 8-10 см. Тампон помещают в пробирку с консервантом.

У детей до одного года кровь берут в доступных количествах из пальца, пятки или мочки уха.

8.1.6. Рвотные массы и промывные воды желудка отбирают при заболевании, сопровождающемся соответствующей симптоматикой, в объеме до 100 мл. Для исследования используют первые порции промывных вод, полученные без применения бактерицидных средств.

В случае кислой реакции (рН

Методические указания МУ 4.2.2723-10 «Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 13 августа 2010 г.)

Текст методических указаний приводится по официальному изданию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Москва, 2010 г.

1. Методические указания разработаны ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора (С.Ш. Рожнова, А.Т. Подколзин).

2. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 13.08.2010 г.

3. Введены впервые взамен МУ «Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды», 1990 г.

Дата введения: 2 сентября 2010 г.

Обзор документа

Установлен порядок проведения лабораторных исследований для обнаружения сальмонелл в клиническом материале, пищевых продуктах и объектах окружающей среды.

Анализ на сальмонеллез проводят в целях диагностики заболеваний, выявления сальмонеллоносительства, обсемененности объектов внешней среды, определения безопасности пищевых продуктов, а также при расследовании вспышек сальмонеллезов для установления источников и факторов передачи возбудителей инфекции. Исследования могут осуществляться только в лабораториях, имеющих право на работу с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности). Помещения и оборудование должны соответствовать СанПиН 1.3.2322-08.

Указания вводятся в действие со 2 сентября 2010 г. Они предназначены для специалистов органов и учреждений Роспотребнадзора, организаций здравоохранения и иных заинтересованных лиц.

Источник